중합효소 연쇄반응(PCR)은 생명과학 실험실에서 가장 잘 알려진 방법 중 하나입니다.
PCR 플레이트는 수집된 샘플 또는 결과의 우수한 취급 및 분석을 위해 일류 플라스틱으로 만들어집니다.
그들은 정밀한 열 전달을 제공하는 얇고 균일한 벽을 가지고 있습니다.
실시간 적용을 준비하기 위해 DNA 또는 RNA의 극소 분획을 분리하여 PCR 플레이트에 저장합니다.
PCR 플레이트는 열 밀봉에 매우 효율적이며 열 흐름을 제한합니다.
그러나 PCR 플레이트는 효율적이고 신뢰할 수 있기 때문에 샘플을 처리할 때 오류와 부정확성이 발생하기 쉽습니다.
따라서 양질의 PCR 플레이트를 얻는 데 관심이 있는 경우. 신뢰할 수 있는 PCR 플레이트 제조업체에 문의하는 것이 가장 좋습니다. 이를 통해 최상의 가격을 얻을 수 있습니다.
다음은 시약 또는 샘플의 오염을 방지하고 부정확한 결과를 방지하기 위한 몇 가지 주의 사항입니다.
환경 소독
불순물의 존재로 인한 부정확한 양성 또는 음성 결과는 결과를 의심하게 만들 수 있습니다.
불순물과 오염 물질은 관련 없는 DNA 또는 화학 첨가제와 같이 다양한 형태로 나타나며 궁극적으로 반응의 효율성과 유효성을 감소시킵니다.
PCR 플레이트의 오염률을 크게 줄이는 방법에는 여러 가지가 있습니다.
멸균된 필터 팁을 사용하는 것은 불순물이 피펫을 통해 샘플에 들어가는 것을 방지하는 또 다른 유용한 방법입니다.
피펫 및 랙을 포함하여 완전히 깨끗한 장비 세트는 특히 PCR 사용을 위해 제공됩니다. 이것은 실험실 주변의 불순물 또는 오염 물질의 무시할 수 있는 이동을 보장합니다.
피펫, 랙 및 벤치에 표백제, 에탄올을 사용하여 오염을 닦아냅니다.
입자 오염을 더욱 줄이기 위해 모든 PCR 반응에 예약된 공간을 할당합니다.
모든 단계에서 깨끗한 장갑을 사용하고 자주 교체하십시오.
PCR 플레이트
템플릿의 농도와 순도를 확인합니다.
PCR을 사용하여 샘플을 분석하는 데 사용되는 벤치 및 장비의 청결도를 유지해야 합니다. 분석 및 처리 전에 샘플의 순도를 확인하는 것이 중요합니다.
일반적으로 분석기는 DNA 샘플의 농도와 순도 수준을 고려합니다.
260nm/280nm의 흡광도 비율은 1.8 이상이어야 합니다. 그런 다음 230nm와 320nm 사이의 파장을 사용하여 불순물을 식별했습니다.
한 예에서 카오트로픽 염 및 기타 유기 화합물이 230nm의 흡광도에서 검출되었습니다. 320nm의 흡광도에서 DNA 샘플의 탁도를 동시에 감지하고 확인합니다.
PCR 플레이트 및 제품의 과부하 방지
동시에 여러 제품을 실행하는 것이 바람직하지만 PCR 플레이트의 교차 오염으로 이어질 수 있습니다.
다른 제품으로 PCR 플레이트를 과도하게 로드하는 것은 낭비이며 샘플을 식별하기 어렵게 만듭니다.
PCR 시약의 분취량 기록 보관
지속적인 동결/해동 주기와 분취량의 빈번한 사용은 재결정화를 통해 PCR 시약, 효소 및 DNTP를 손상시킬 수 있습니다.
분석을 위해 샘플을 준비할 때 사용되는 분취량의 비율을 항상 모니터링하도록 노력하십시오.
선호하는 LIMS는 동결 또는 해동할 시약 및 샘플의 재고 및 양을 제어하는 데 더 적합합니다.
최적의 어닐링 온도를 선택하십시오.
잘못된 어닐링 온도를 선택하고 사용하는 것은 PCR 결과에 오류가 포함되는 또 다른 방법입니다.
응답이 계획대로 진행되지 않는 경우가 있습니다. 성공적인 반응을 촉진하려면 어닐링 온도를 낮춰야 합니다.
그러나 온도를 낮추면 위양성 및 프라이머-다이머의 가능성이 높아집니다.
PCR 플레이트를 사용할 때 용융 곡선의 분석을 확인하는 것은 올바른 어닐링 온도를 선택하기 위한 좋은 지표이므로 중요합니다.
프라이머 디자인 소프트웨어는 디자인을 지원하여 정확한 어닐링 온도를 제공하고 PCR 플레이트의 오류를 직접 줄입니다.
pcr 플레이트