세포 배양 배지는 새로운 세포 합성 및 세포 대사와 같은 생화학 반응에 필요한 물질 및 에너지를 충족시키기에 충분한 영양분을 함유해야 합니다. 세포 배양 배지의 주성분은 물, 아미노산, 비타민, 탄수화물, 무기염 및 기타 보조 영양소입니다. 따라서 일상 실험에서 세포 배양 배지의 멸균 방법 및 관련 주의 사항에 주의를 기울여야 합니다.
세포 배양
1. 세포배양액별 멸균방법 및 주의사항
세포 배양 배지의 멸균 방법은 오토클레이브 멸균과 막여과 멸균으로 구분된다. 서로 다른 배양 배지는 영양소가 다르기 때문에 멸균 방법이 다를 수 있습니다.
압력솥
MEM과 같은 일부 매체는 오토클레이브될 수 있으며 이러한 매체는 일반적으로 L-글루타민 및 중탄산나트륨을 포함하지 않으며 일반적으로 매체가 오토클레이브된 후에 추가됩니다. 또한, L-글루타민 대신에 고압 글루타메이트(예: L-알라닐-L-글루타민)를 사용할 수 있습니다. 오토클레이브 배지는 멸균 시간을 연장하지 않고 121도, 15psi 및 15분에서 영양소 손실을 최소화하면서 완전히 멸균됩니다.
대부분의 세포 배양 배지는 오토클레이브에 적합하지 않습니다. 배양 배지에는 종종 비타민, 단백질, 폴리펩티드, 성장 인자 및 기타 물질이 포함되어 있기 때문에 이러한 물질은 고온 또는 방사선 노출 시 변성 또는 기능 손실이 발생하기 쉽기 때문에 위에서 언급한 액체는 대부분 여과 및 멸균되어 박테리아를 제거합니다. 여과 및 멸균에 사용할 수 있는 여과막은 여러 가지가 있으며 그 재질은 대부분 PES, 나일론, 폴리카보네이트, 셀룰로오스 아세테이트, 니트로셀룰로오스, PTFE, 세라믹 등입니다. 막 여과 멸균은 현재 일반적으로 사용되는 편리한 방법입니다. 기공 크기가 0.2 μm인 필터 멤브레인이 자주 사용되며 일부는 0.1 μm 기공 크기를 사용합니다. 고압 여과에 비해 멤브레인은 수명이 있고 더 비싸지만 세포 배양 배지의 영양분에 덜 파괴적입니다.
2. 서로 다른 세포배양액 보관시 주의사항
일반적으로 액체 세포 배양 배지는 해동 중에 영양분이 침전되어 배양 효과에 영향을 미칠 수 있으므로 -20도에서 동결해서는 안됩니다. 정상적인 상황에서는 빛으로부터 2 ~ 8도 떨어진 곳에 보관해야 합니다. 사용하기 전에 냉장고에서 꺼내 실온에 두어 평형을 이루도록 합니다. 일반적인 액체 매체는 6~12개월 동안 유효합니다. 액체 세포 배양 배지의 장기 보관을 피하십시오. 저장 시간이 길어짐에 따라 글루타민이 천천히 분해됩니다. 세포 성장이 좋지 않은 경우 배지의 글루타민 함량을 테스트하여 글루타민 추가 여부를 결정할 수 있습니다. . 시중에서 판매되는 액체 세포 배양 배지에는 특정 유효 기간이 있습니다. 건조 분말 세포 배양 배지를 사용하여 액체를 준비한 후에는 저온(2 ~ 8도)에서 보관해야 합니다. 배지에서 글루타민이 쉽게 분해되는 것 외에도 배지의 다른 성분도 온도가 증가함에 따라 분해되거나 침전될 수 있습니다.
