우리 모두가 알고 있듯이, 실험실에서 배양되는 세포의 종류는 크게 접착세포와 현탁세포의 두 종류로 나눌 수 있으며, 두 상태 모두 소수의 세포만이 존재합니다.
부유 세포는 림프구 및 대부분의 혈액계 유래 세포와 같이 지지체에 의존하지 않고 배지에서 부유 상태로 성장할 수 있는 세포 유형을 말합니다. (예: 마우스 백혈병 세포 WEHI-3, 인간 백혈병 세포 K-562, HL-60). 업계에서 점점 더 많은 부착성 세포가 길들여지고 완전 현탁액에서 배양되었습니다. 현재 SP2/0, NS0, CHO, BHK 및 HEK293 세포는 주로 산업에서 사용되며 주로 재조합 단백질 생산에 사용됩니다. 수의학 생물학적 제품에 일반적으로 사용되는 계대 세포는 주로 전체 현탁액에서 배양된 BHK21 세포, MDCK 세포를 포함합니다. 및 Vero 세포, PK 세포, ST 세포, Marc145 세포 등을 마이크로캐리어 현탁 배양의 도움으로 각각의 세포는 다른 특성을 갖는다.
현탁 세포
서스펜션 셀 "thp-1" 200x
일반적으로 현탁 세포는 부착 세포보다 다루기 쉽습니다. 현탁 세포의 계대에 트립신 처리가 필요하지 않기 때문입니다. 그러나 이것이 부유 세포가 부착 세포보다 성장하기 쉽다는 것을 의미하지는 않습니다. 초보자에게는 더 어렵습니다. 항상 다양한 문제가 있습니다. 예를 들어 왜 죽은 세포와 세포 분화가 항상 나타나는지; 통과가 쉽다는 데 동의하지만 결과는 차별화될 것입니다. 냉동 보존 및 복구 후 문제가 다시 나타납니다!
다음으로 현탁세포 배양에 대한 핵심사항에 대해 알아보겠습니다~
포인트 1: 충분한 인내심, 매우 필요합니다.
많은 현탁 세포는 냉동 보존에서 막 회수되었을 때 상대적으로 생존력이 낮습니다. 이때 우리는 세포가 자가 복구를 완료하고 대수 성장 단계에 들어갈 때까지 충분히 인내심을 가져야 합니다. 예를 들어, THP-1(인간 단핵구 백혈병)는 종종 해동에서 정상 증식까지 7-10일의 회복 기간이 필요합니다. Jurkat, Clone E6-1(인간 T 림프구성 백혈병 세포)도 회복 후 5-7일이 필요합니다. 얼기 전의 상태로 되돌립니다. 초보자는 이 기간 동안 훈련을 포기할 수 있으므로 더 많은 인내심을 가지십시오! 그러한 세포를 배양하는 것 또한 인내를 배양하는 과정입니다!
포인트 2: 접종 밀도 파악
일반적으로 서스펜션 셀의 밀도는 500000/ML 이상이어야 합니다. 많은 현탁 세포는 밀도 의존적이며 낮은 밀도로 인한 비증식도 초보자에게 공통적인 문제 중 하나입니다. 물론 W6/32(마우스 B세포 하이브리도마 세포)처럼 밀도가 높을수록 상태가 나빠지는 세포는 거의 없다. 따라서 미지의 세포를 배양하기 전에 세포의 특성을 파악하기 위한 관련 정보를 찾는 것이 매우 중요하다. 자신과 적을 알아야만 모든 전투에서 승리할 수 있습니다!
매체 교체 빈도는 "분명히"로 제한되어서는 안 됩니다. 세포는 살아있는 것입니다. 연속적인 배양 주기 동안 세포의 성장 상태에 따라 보충 배지 및 포도당과 같은 특정 영양소를 여러 번 첨가하여 세포의 양호한 성장 상태를 유지할 수 있습니다. . 부유 배양 과정에서 세포의 증식, 원래 배지의 영양소 소비 및 대사 산물의 증가로 인해 세포의 생존력이 감소하고 적시에 영양소를 보충하면 세포가 비교적 좋은 생활 환경에 있게 됩니다. 여기서 자세히 설명하지 않고 빈번한 원심분리 및 액체 교체를 피합니다.
액체 교체 방법에 대해 이야기합시다.
①원심 완전 액체 교환 방식
즉, 원심분리(800-1000rpm, 5분)하여 오래된 배지를 모두 제거하고 새 배지로 교체합니다. 이 방법은 "skin solid" 잘 자란 현탁 셀(예: K562)의 배지 교체 또는 셀의 상태가 양호하고 밀도가 높아 배지를 많이 소모하는 현재 상황에 적합합니다. 이 방법의 장점은 배지를 완전히 교체하고 일부 세포 파편을 제거할 수 있지만 세포에 어느 정도의 기계적 손상을 유발한다는 것입니다.
②원심 반교환 방식
즉, 50% 세포 현탁액을 원심분리(800-1000rpm, 5분)하여 새 배지의 50% 부피를 교체합니다. 이 방법은 "위선" 배양이 어려운 세포(예: thp-1)를 비교하거나 밀도는 낮지만 조정 상태에서 더 많은 파편을 제거해야 하는 상황에 적합합니다.
③침전액 교환법
즉, 원심분리기를 사용하는 대신 중력에 의한 자연침강법을 이용하여 배지와 균체를 분리하여 새로운 배지의 전부 또는 일부를 교체하는 것이다. 그러나 적용 제한이 있습니다. 특정 크기의 세포 클러스터를 형성할 수 있는 세포에만 적합합니다(그렇지 않으면 자연적으로 정착할 수 없고 저속으로만 원심분리할 수 있음). 특히 증식을 위해 세포 응집에 의존하는 세포를 다룰 때 , 예: NK-92, NK- 92 MI, Jurkat. 이 방법은 응집된 세포 덩어리를 유지하면서 액체 교환 과정에서 원심 분리 과정으로 인한 기계적 손상을 최소화할 수 있으며 세포 파편의 제거가 비교적 철저합니다.
위의 사항과 좋은 세포 시드를 숙달한 후에는 "아름다운" 현탁 세포를 성장시킬 수 있는 모퉁이를 돌면 됩니다!
세포 배양 플레이트
Yongyue Medical의 U자형 세포 배양 플레이트는 주로 현탁 세포 배양에 사용되며, 의료용 폴리스티렌(PS)을 사용하고, 100000-레벨 정화 작업장에서 생산되며, 조사에 의해 멸균되고, DNase, RNase 및 발열원이 없습니다. -무료, 안전 및 환경 보호.
세포 배양 플레이트는 다양한 박테리아 배양 요구를 충족시키기 위해 다양한 사양으로 제공됩니다. 제품 유형은 6-웰, 12-웰, 24-웰, 48-웰, 96-웰 및 384-웰로 구분됩니다. 96-웰은 평평한 바닥, U 바닥, V 바닥 바닥으로 나뉩니다. U자형 배양 플레이트는 주로 현탁 세포 배양에 사용됩니다. V자형 배양판은 면역학적 혈구응집 실험에 주로 사용됩니다.
