세포 배양 플레이트는 세포 실험을 위한 시간과 시약 재료를 절약할 수 있고 관찰과 검출을 용이하게 하기 위해 동시에 여러 동적 변수를 설정할 수 있기 때문에 세포 배양 실험에서 일반적으로 사용되는 중요한 소모품입니다.
배양 접시
1. 96 24-well culture plate나 petri dish는 뚜껑이 많이 헐거워 통풍이 잘 되지만 세균, 곰팡이 등 오염물질이 끼어들까?
대답: (1) 덮개가 매우 느슨하고 반 개방 문화에 속합니다. 이것의 목적은 호흡(실제로는 배양접시 외부의 CO2를 배양접시와 완전히 교환하여 배지의 pH값을 유지하기 위함)입니다.
(2) 공해 가능성을 높이는 장단점이 있다. 또한 이로 인해 페트리 접시의 액체가 증발하여 정확한 약물 투여가 가능합니다. 따라서 다음 두 가지 조치가 필요합니다.
a) 인큐베이터의 공기는 깨끗해야 합니다.
b) 인큐베이터의 습도는 항상 100%로 유지되어야 합니다(인큐베이터에 멸균 증류수가 담긴 싱크대). 무균작업에 주의!
2. 배양접시에 나의 세포를 접종하여 항상 말초부에 세포가 모인다. 어떻게 해야 하나요? 중간에 몇몇 전우들의 세포가 모여있는 것을 봅니다. 접시의 품질에 문제가 있습니까?
A: 어떻게 세포를 혼합합니까? 피펫을 불거나 배양 플레이트를 흔들고 있습니까? 후자의 경우 원을 그리며 흔들면 원심력으로 인해 세포가 주변 부분으로 던져져 세포 중간에 생길 가능성이 큽니다. 4주 이상! 당신은 그것을 직접 시도 할 수 있습니다!
좋은 방법: 시드 플레이트를 재배하기 전에 배양 플레이트를 인큐베이터에 넣고 몇 시간 동안 포화시킨 다음 꺼내십시오. 세포를 파종할 때 힘은 가벼워야 합니다. 배양 플레이트 구멍의 측면에 있는 드립퍼를 천천히 추가하여 세포 현탁액이 플레이트의 웰로 흘러 들어가고 배양된 세포가 실질적으로 균일하게 성장할 수 있습니다. 오실레이터를 절대 흔들지 마십시오. 그렇지 않으면 당신이 말한 것처럼 세포가 뭉칠 것입니다.
3. 내 세포는 정상적으로 계대되지만 한 종류가 6웰 플레이트에 들어갈 때(약물 첨가 및 대조 여부와 관계없이) 항상 잘 자라지 않고, 작고, 작게 보이는 2~3개의 웰(랜덤) 세포가 있습니다. 깨지다. 아무도 이것을 본 적이 있습니까? 이유가 무엇입니까?
A: 추가하는 액체의 온도와 관련이 있을 수 있습니다. 세포를 막 꺼내어 배지를 갈아주고 배지를 추가하고 배지도 곧 4도 냉장고에서 꺼내면 세포가 얼어죽기 쉽습니다. 먼저 배양기에서 15분 동안 배지를 가장 잘 배양하는 것이 좋습니다.
또한 세포의 성장 상태와도 관련이 있습니다. 투약 전 세포는 높은 혈청 농도로 배양할 수 있습니다. 세포가 양호한 상태인지 확인하십시오.
또는 37-도 수조에서 배양하거나 배양 플레이트 자체의 문제인 경우 다른 배양 플레이트를 사용해 볼 수 있습니다. 또 다른 가능성은 세포 상태 문제입니다. 플레이트를 뿌릴 때 혈청 농도를 조정하십시오.
4. 최근에는 6웰 배양 플레이트를 사용하여 세포를 접종했습니다. 24시간 배양 후 배지를 바꾸었다. 배지를 바꾸기 전에 세포가 벽에 붙는 것을 관찰하였고 상태는 매우 양호하였다. 배지를 바꾼 후 바로 현미경을 사용했습니다. 각 웰의 거의 절반의 세포가 임사 상태를 나타내는 것으로 관찰되었습니다. 세포가 매우 작아지고 파편이 많이 생성되는 반면 나머지 절반은 정상 세포, 비정상 세포와 정상 세포 사이에 분수령이 있고 위쪽 반원이 좋고 아래쪽 반원이 좋지 않습니다. 이것? 무슨 일이야?
A: 다음과 같은 이유가 있는지 확인할 수 있습니다.
ㅏ. 배양 플레이트는 수평으로 놓이지 않습니다.
비. 배양 배지는 어떻습니까? 배양 배지가 만료되면 세포가 부착되지 않습니다. 신선하게 준비한 매체를 시도하십시오
씨. 판의 문제일 수 있습니다. 다른 브랜드의 접시를 바꾸거나 배양병을 사용해도 문제 없습니다.
디. 배지를 교체할 때 팬의 영향, 특히 교체해야 할 배양 플레이트가 많은 경우 바람과 수분 손실로 인해 세포가 수축 및 파열되기 쉽습니다. 그렇다면 배지를 하나씩 교체해야 하며 피펫을 낭비하는 것을 두려워하지 말고 작업의 효율성에 주의하십시오!
5. 24-웰 플레이트에 세포 소화 및 접종 후 4일이 경과하였으며, 각 웰의 중간 부분은 항상 가득 차 있었다. 배지는 매일 PBS로 세척하였고, 다음날 배지를 갈아주어도 같은 현상이 발생하였다. 가장자리는 잘 길고 가운데는 죽은 세포로 가득 차 있습니까?
대답: 세포가 주위에 밀집하고 중간에 희박한 경우 대략 다음과 같은 이유가 있습니다.
매체가 너무 적게 추가되었습니다. 주로 액체 장력 문제 때문입니다.
인큐베이터 바닥에 물이 적은지 여부;
세포 파종 후 흔들림이 너무 심했습니다. 세포는 원심력으로 인해 주위에 분포합니다.
세포가 고르게 분포되어 있는지 여부의 핵심은 세포 유형마다 개인차가 있으며 다른 사람의 세포 운영이 자신에게 적합하지 않을 수 있다는 것입니다. 따라서 스스로 탐색하고 자신의 세포에 고유한 일련의 규칙을 찾아야 합니다. 다음과 같은 경험이 있습니다.
(1) 접종할 모든 세포 현탁액은 접종 전에 피펫으로 혼합해야 합니다.
(2) 기록에 따르면 24-웰 플레이트의 액체 부피는 1ml이며, 실제로는 1ml면 충분합니다.
(3) 접종 시 시료를 천천히 첨가하고 피펫 팁을 약간 회전시키는 것을 잊지 마십시오. 하나의 샘플 추가 지점에 세포가 축적되는 것을 피하기 위해 샘플을 너무 빨리 추가할 수 없으며, 이동식 총을 추가하는 동안 다른 부분에 샘플을 추가하는 데 주의를 기울여야 합니다. 머리, 인위적으로 세포가 고르게 분포되도록 합니다. 그렇게 하면 세포를 고르게 분포시키는 효과가 있다.