세포 배양 과정에서 종종 이런저런 문제가 발생합니다. 세포 배양을 과소 평가하지 말고 대학 질문이 포함되어 있습니다. 사용자와 소통하면 피할 수 있는 많은 문제를 발견할 수 있습니다. 다음은 세포 배양 과정에서 일반적입니다. 이상 원인을 분석합니다.
페트리 접시
1. 배양세포가 벽에 붙지 않는다.
가능한 이유
1. 과도한 트립신 소화;
2. 마이코플라즈마 오염;
3. 매체의 pH 값이 너무 알칼리성입니다(NaHCO3 분해).
4. 세포 노화;
5. 접종된 세포의 초기 농도가 너무 낮거나 너무 높습니다.
해결책
1. 트립신 소화 시간 단축 또는 트립신 농도 감소;
2. 배양액을 분리하고 마이코플라즈마를 검출합니다. 스탠드 또는 인큐베이터를 청소하십시오. 마이코플라스마 오염이 발견되면 배양액을 폐기하십시오.
3. 멸균 아세트산 용액을 사용하여 pH를 조정하거나 멸균 CO2로 채웁니다.
4. 새로운 보존 세포를 활성화합니다.
5. 최적의 접종 세포 농도를 조절한다.
2. 서스펜션 셀의 클러스터링
가능한 이유
1. 배양 배지에는 칼슘 및 마그네슘 이온이 포함되어 있습니다.
2. 마이코플라즈마 오염;
3. 프로테아제에 의한 과소화는 세포 용해를 유발합니다.
4. DNA 오염.
해결책
1. 칼슘과 마그네슘이 없는 균형잡힌 식염수로 세포를 세척하고 부드럽게 불어서 빨아들입니다.
2. 세포는 단일 세포 현탁액을 얻습니다.
3. 배양물을 분리하고 마이코플라즈마를 검출합니다.
4. 세포의 DNasel 처리.
3. 배양된 세포는 천천히 자랍니다.
가능한 이유
1. 다른 배지 또는 혈청의 교체로 인해;
2. 글루타민 또는 성장 인자와 같은 배양 배지에서 세포 성장에 필요한 일부 구성 요소가 고갈되거나 부족하거나 파괴되었습니다.
3. 배양액에 소량의 세균 또는 진균 오염이 있습니다.
4. 시약의 부적절한 보관
5. 접종된 세포의 초기 농도가 너무 낮습니다.
6. 세포가 노화되었습니다.
7. 마이코플라스마 오염.
해결책
1. 새 배지와 원래 배지의 조성을 비교하고 새 혈청과 이전 혈청을 비교하여 세포 성장 실험을 지원하고 세포가 점차 새 배지에 적응하도록 합니다.
2. 새로 준비한 배양 배지로 바꾸거나 글루타민 및 성장 인자를 추가합니다.
3. 무항생제 배지를 사용하여 배양하고, 오염이 확인된 경우 배양액을 폐기하십시오.
4. 혈청은 -10 ~ -20도에서 보관해야 합니다. 배지는 암실에서 2-8도에서 보관해야 합니다. 혈청 함유 완전 배양 배지는 2-8도에서 보관해야 하며 1주일 이내에 다 사용해야 합니다.
5. 접종된 세포의 초기 농도를 높입니다.
6. 새로운 보존 셀로 변경
7. 배양을 분리하고 마이코플라스마를 검출합니다. 스탠드와 인큐베이터를 청소하십시오. 마이코플라스마 오염이 발견되면 배양액을 폐기하십시오.
넷째, 배양세포가 잘 자라지 않는다.
가능한 이유
A. 세포 자체의 상태
1. 세포 계대의 수가 많고 세포가 노화되고 있습니다.
2. 세포 접종량: 너무 적은 접종량, 느린 세포 성장;
3. 세포의 통과가 너무 늦음: 통과 후 세포의 성장에 영향을 미치는 세포 중독;
4. 트립신 소화 시간이 너무 길거나 너무 짧습니다. 시간이 너무 길면 세포가 죽습니다. 시간이 너무 짧으면 세포가 클러스터로 완전히 분리되지 않고 세포가 죽습니다.
5. 세포의 동결보존 및 회수: 느린 동결 및 즉시 용해.
나. 오염
1. 마이코플라즈마 오염;
2. 곰팡이 오염.
C, 배양 배지 또는 혈청
1. 혈청 또는 배지 교체 전 검증 없음;
2. 선택한 매체의 적합성 여부
3. 배지준비가 적절한지 여부
4. 배지 준비가 정확한지 여부.
D. 환경을 가꾸기 위해
1. CO2 공급은 정상인가?
2. 인큐베이터 또는 진탕기의 온도가 적절하게 제어됩니다.
해결책
위의 네 가지 가능한 이유에 따라 대상 솔루션을 만듭니다.
1. 계대의 수, 접종량 등과 같은 세포 상태에 주의하십시오.
2. 오염을 피하십시오(정규적이고 합법적이며 추적 가능한 혈청 사용).
3. 가급적 검증된 적절한 혈청 또는 배지를 사용하십시오.
4. 실험실 환경에 주의를 기울이십시오.
배양에서 세포 사멸의 가능한 원인
1. 인큐베이터에 CO2가 없습니다.
2. 인큐베이터의 온도 변동이 너무 심합니다.
3. 동결보존 또는 회수 과정에서 세포가 손상되는 경우
4. 배양 배지의 삼투압이 올바르지 않습니다.
5. 배양 배지에 독성 대사 산물의 축적.
해결책
1. 인큐베이터에서 CO2를 감지합니다.
2. 인큐베이터의 온도를 확인하십시오.
3. 새로운 보존 세포 종을 취하십시오.
4. 배양 배지의 삼투압을 감지합니다.
5. 신선한 배양 배지로 변경;