사용 후에는 PCR 8-tube kit를 세척해야 합니다. PCR Octal Kit를 청소하는 몇 가지 방법이 있습니다. 사용할 때 주의해야 할 점은 무엇입니까?
실험 방법의 원리: 실리카겔 막은 고염 조건에서는 DNA에 결합하고 저염 조건에서는 DNA에서 분리됩니다. 프라이머, 모노뉴클레오타이드, 효소, 미네랄 오일, 염 이온 등은 DNA와 유사한 성질을 가지지 않아 DNA 함유 세척액에서 분리됩니다.
실험 재료: PCR 제품, 시약, 키트, PCR 세척 키트, 기구, 소모품, 96-well DNA 준비 플레이트, 96-well deep-well plate, 96-well V-shaped plate
1. PCR 8-tube 제조사가 키트의 구성, 보관 및 안정성에 대해 이야기합니다.
1. 지침, 소모품: 96-웰 DNA 준비 플레이트, 96-웰 1.6ml 딥웰 플레이트, 96-웰 V형 플레이트.
2. 완충액 PCR-A: DNA 결합 용액. 밀봉하여 실온에서 보관하십시오. 침전이 발생한 경우에는 65도의 온욕에 녹이고 실온으로 식힌 후 사용한다.
3. 완충액 W2 농축액: 염 용액을 제거합니다. 사용하기 전에 병에 명시된 용량까지 에탄올을 첨가하고 잘 섞은 다음 실온에서 보관하십시오. 100% 에탄올 또는 95% 무수 에탄올을 사용할 수 있습니다.
4. 용리액: 2.5mM Tris-HCl, pH 8.5, 실온에서 밀봉된 상태로 보관됨.
2. PCR 8연관 제조사가 말하는 조작 단계
사용자는 음압 또는 원심 분리를 선택할 수 있습니다.
A. 음압 방식
1. 음압 장치를 올바르게 연결하고 96-웰 DNA 준비 플레이트를 음압 장치에 놓습니다. PCR, 효소 분해, 효소 표지 또는 시퀀싱 반응 용액에 3배 완충액 PCR-A를 추가합니다(완충액 PCR-A가 100ul 미만인 경우 100ul 추가). 잘 혼합하고 96-well DNA 준비 플레이트로 옮기고 전원을 켜서 음압을 -25-30인치 Hg로 조정하고 플레이트의 용액을 천천히 흡인합니다.
2. 0.3ml의 버퍼 W2를 추가하고 용액을 흡수합니다. 동일한 방식으로 0.3 ml의 완충액 W2로 두 번 씻습니다.
시약 병에 표시된 완충액 W2 농축액에 무수 에탄올을 추가했는지 확인합니다.
3. 음압을 유지하고 10분 동안 {{1}well DNA 준비 플레이트를 추출합니다.
4. 긴 섬유 조직의 96-well DNA 준비 플레이트를 배액관이 아래로 향하게 하여 6번 갈아줍니다.
5. 96-웰 DNA 준비 플레이트를 96-웰 V자형 플레이트에 놓고 25-30ul의 물 또는 용출액을 멤브레인 중앙에 추가하고 1분 동안 그대로 둡니다. 실온에서. 5분 동안 3 000 xg에서 원심분리하여 DNA를 용출했습니다.
B. 원심
1. PCR, 소화, 효소 라벨링 또는 시퀀싱 반응에 3부피의 Buffer PCR-A를 추가합니다(Buffer PCR-A가 100ul 미만인 경우 100ul 추가). 혼합하고 96-웰 준비 플레이트의 96-웰 DNA로 옮깁니다. DNA 준비 플레이트를 96-웰 1.6ml 딥 웰 플레이트에 넣고 1000 xg에서 1분 동안 원심분리하고 여과액을 버립니다.
2. 96-웰 DNA 준비 플레이트에 0.3 ml의 완충액 W2를 추가하고 1000xg에서 1분 동안 원심분리하고 여액을 버립니다. 완충액 W2 0.3ml로 같은 방법으로 다시 씻는다. 시약 병에 표시된 완충액 W2 농축액에 무수 에탄올을 추가했는지 확인합니다.
3. 96-웰 DNA 준비 플레이트를 96-웰 1.6ml 딥웰 플레이트에 넣고 3 000×g에서 10분 동안 원심분리합니다.
4. 96-웰 DNA 준비 플레이트를 깨끗한 96-웰 V자형 바닥 플레이트에 놓고 물 25-30ul 또는 용출액을 멤브레인 중앙에 추가한 다음 실온에서 1분. 5분 동안 3 000 xg에서 원심분리하여 DNA를 용출했습니다.
PCR 8진관 제조업체는 주의가 필요한 문제에 대해 다음과 같이 이야기합니다.
1. 용리액 또는 물을 65도까지 가열하면 용출 효율을 높일 수 있습니다.
2. DNA 분자는 산성이므로 2.5mM Tris-HCl, pH 8.5 용출액에 보관하는 것이 좋습니다.
