포유류 세포 배양 과정
포유류 세포는 조직 추출, 1차 배양, 계대 배양의 과정을 거칩니다. 계대배양은 조건에 따라 세포주 배양과 세포주 배양으로 나눌 수 있다. 각 프로세스를 간략하게 설명하면 다음과 같습니다.
1차 배양: 동물에서 조직을 제거한 후 잘게 썰고 다양한 효소(보통 트립신), 킬레이트제(보통 EDTA) 및 기계적 방법(반복 흡인 및 피펫 블로잉)으로 처리한 다음 개별 세포에 분산시키고, 세포가 생존, 성장 및 증식할 수 있도록 하는 적절한 배지. 1차 세포 배양은 일반적으로 동물에서 세포를 제거한 후 10 계대 이내의 세포 배양을 의미합니다.
1차 세포 배양, 세포 분열 및 번식 후 배양이 점차 증가하고 성장이 배양 공간을 채우고 나서 서로 접촉하여 접촉 억제가 발생하고 성장 속도가 점차 느려지거나 심지어 멈춥니다. 계대 배양을 위해 새 배양 플라스크에 다시 시드해야 합니다.
계대(passage): 배양 플라스크에서 1차 세포를 꺼내 세포 현탁액을 준비하고, 추가 배양을 위해 2개 이상의 배양 플라스크로 나누는 것을 계대 배양이라고 합니다.
세포주: 세포주는 1차 배양에서 첫 번째 계대 후의 세포주입니다. 세포주의 생존 시간이 제한되어 있는 경우를 유한 세포주라고 합니다. 무한한 생식 능력을 획득하여 계속해서 생존하는 세포주를 연속 세포주 또는 무한 세포주라고 합니다.
세포주: 생물학적으로 확인된 세포주에서 단일 세포 분리, 배양 또는 스크리닝에 의해 형성된 세포 집단을 세포주라고 합니다. 그런 다음 다른 모양의 세포 집단을 1차 세포주에서 분리하고 배양하여 서브클론을 형성합니다.
포유류 세포 배양 조건
다른 포유류 세포는 각 단계에서 기본 배양 조건이 필요합니다
1. 무균 및 무독성 환경: 배양 배지 및 모든 배양 장비의 무균 처리; 배양 과정에서 오염을 방지하기 위해 배양 배지에 항생제를 첨가하는 단계; 배양된 세포의 손상을 방지하기 위해 대사 산물을 제거하기 위해 배양 배지를 정기적으로 교체합니다.
2. 영양: 액상 합성배지에는 당, 아미노산, 성장촉진인자, 물, 무기염, 미량원소 등이 포함되어 있다. 일반적으로 혈장, 혈청과 같은 천연성분의 첨가가 필요하다.
3. 적절한 온도 및 pH 값: 인간 및 포유동물 세포의 최적 온도는 36±{2}}.5도입니다. 적절한 pH 값은 7.2-7.4입니다.
4. 가스 환경: 가스 환경은 일반적으로 "95% 공기 + 5% 이산화탄소" 혼합 가스입니다. 산소는 세포 대사에 필요한 기체이며 이산화탄소는 배지의 pH를 유지합니다.